1、 仔細閱讀說明書。
2、 檢查試劑盒標簽上的有效期。如果超過有效期，請勿使用。
3、 按說明書確定所有試劑齊全（數量、體積）。
4、 標本制備要規范，每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份。 短期內無法實驗者，注意低溫保存。
5、 準備好所有實驗額外所需物品（比如移液器，試管，清洗器，酶標儀）。
6、 按說明書將所用試劑平衡至室溫，根據檢測標本數量確定所需試劑的量。
7、 檢查試劑盒內每種試劑的貯存條件，保證所有試劑均按照試劑盒內說明書推薦的條件存儲。
8、 檢查不穩定或者變質的試劑溶液（比如沉淀或變色）。有些試劑，比如標準品稀釋液或者檢 測稀釋液，可能在設計時就含有沉淀物。所有試劑在滴入酶標板之前，必需充分混勻。而由于沉淀物的特性，在加入酶標板之前，必需不停攪拌。
9、 保證充分的孵育時間和溫度。
10、 切勿使用不同生產批號的試劑取代現有試劑或混合現有試劑。
11、 在混合或溶解蛋白溶液時，避免泡沫產生。
12、 在實驗開始之前，安排好實驗流程。
13、 在實驗開始之前，清潔工作臺。
ELISA實驗中務必注意事項
1、要保證移液槍的準確性，誤差不能超過2%。可用水和電子天平進行確定。但需要有專業人員進行矯正。
2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后，要更換槍頭。即使是吸取標準品時。
3、要在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復到室溫，以使結果更穩定。
4、ELISA試劑盒實驗時，要使底物避光保存。
5、用槍吸取液體時速度不能太快，以免產生氣泡而使吸取量不準確。
6、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。
7、將液體加到酶標孔中時，避免槍頭和孔內液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去。
8、液體全部加完后，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。
9、應盡量做雙孔實驗，這樣才能保證數據的準確性。
10、ELISA試劑盒對結果有疑問的樣品要用其它方法進行確證。
